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123儀器商城教你如何制備色譜

2010-12-23

123儀器商城教你如何制備色譜
制備型色譜是在分析型色譜的基礎上建立起來的，是一個從量變到質變的過程。廣義講所有不同類型的色譜都能轉成制備型色譜，從制備規模和產值利潤考慮，制備型液相色譜當屬優選的方法。
以中藥制藥為例。在確定了藥物的有效性后在分析型色譜的基礎上逐步發展成制備型色譜。
在研發階段先用小型的制備色譜制備mg級試樣供有效組分或有效部位的理化性質的研究和化學結構的分析。
從分析型到制備型液相色譜表現在樣品進樣量放大。與此相適應：（1）泵流量、色譜柱長和柱內徑相應放大；（2）填料的填裝量放大到幾百克到幾十千克，甚至上百千克，填料粒度達40—80um；（3）流動相組成和檢測器參數也要做相應的修改。
市場上出售的制備色譜柱尺寸規格還有更大的，填料硅膠C4、C8、C18、氰基、醇基等鍵合相。
雜質常與被純化的組分混在一起，可用以下幾種流程分步地將雜質和被純化的組分分開。
1、分段收集被子色譜柱分離了的組分按檢測器監測的色譜峰收集。在檢測器的出口接一個組分收集切換閥，一個組分收集完畢后轉動切換閥到另一個收集品收集流出液，可以多次進樣，同一個組分收集在一起。選擇有效組分的收集液經濃縮、洗滌、凈化即可得到粗產品，棄去雜質和其它元用組分的收集液。能實施分段收集的首要條件是有效組分色譜峰無其它色譜峰的干擾。
2、重復制備多數情況下被純化的組分常與雜質糾纏在一起，不適宜用分段收集法。重復制備是簡單的方法。第1次制備收集到的有效組分洗脫液經濃縮后進行第2次制備，第1次制備可除去部分雜質；第2次制備收集到的有效組分洗脫液經濃縮后進行第3次制備，第2次制備已除去大部分雜質；第3次制備……
第一次制備收集到大量的洗脫液，必須濃縮后才能進行下一次的制備，溶劑的消耗大，產率不高。
3、循環制備再循環系統由一個制備量泵、一個進樣器、一個六通閥、兩根制備色譜柱、兩個檢測器組成。連接方法：樣品進入系統后，先經柱1和檢測池1（六通閥實線相通），繼而進入柱2，等所有的組分完全通過檢測池2后，轉動六通閥（六通閥虛線相通），使柱2的洗脫液再導入柱1，這相當于第三次循環，直到分離效果滿意為止再收集。
這種循環完全在密封系統中進行，不涉及到柱外擴散的死體積，分離效果尚好。但每次循環通過柱1和柱2的流動相方向都相同，色譜峰會自動擴散變寬。
4、反沖制備前面已介紹過反沖技術，此處介紹如何應用反沖技術制備純化有效組分。在制備的樣品中含有保留很強的雜質或組分，可選用反沖制備方法。不需要反復循環，流程一次循環可制備完畢。
這種制備方式只要1臺泵，1個進樣器，1個檢測器，兩根色譜柱。增加1個六通的切換閥，1個五通的反沖閥（可用六通閥代替）。進樣后樣品隨著流動相沿實線（→）由柱1經反沖閥到柱2，經切換閥再回到反沖閥，從檢測器的監測中棄去雜質、收集有效組分后立即同時轉動反沖閥和切換閥。此時流動相沒圖中的虛線（→）首先進入反沖閥，再反相流經柱1經切換閥后反相流經柱2，后從檢測器流出，后去掉保留很強的雜質，或者洗脫保留很強的組分。
通過反沖流動相先后兩次以不同的方向進入1和2柱。反沖前可去掉干擾有效組分的雜質，并收集有效組分，反沖后那些保留很強的雜質或組分以相同的速度從原路返回，后流出檢測器。整個流程節約了大量因洗脫強保留雜質和組分消耗掉的流動相。

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